影響ELISA試劑盒實驗的因素
一、試劑盒
1、抗原、抗體活性對效價的影響：主要是試劑中抗體(或抗原)的效價降低或失活，結果不易判斷。再有ELISA法靈敏度高，對雜質的反應靈敏度也高，實驗中空白對照OD值偏高或假陽性;
2、酶結合物濃度過高，也會導致OD值假性增高。
二、試驗儀器
1、ELISA試劑盒加樣器是否經過校正，酶免測定血清用血量很少，如手工加樣器的性能不好，吸取樣品不，會使結果忽高忽低;
2、每次洗板前，應檢查洗板機針孔有無堵塞。
三、操作
1、檢測前先將試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min后使用，試劑用完及時放回冰箱冷藏，以免造成試驗結果假性降低;
2、加樣時注意勿觸及包被板底部，以免擦傷包被物使抗體(抗原)脫落而影響實驗結果的準確性;
3、洗滌不充分，會使結果假性增高，過分洗滌呈假陰性;
4、比色時應保持包被孔底部無異物、無水汽，特別是冬季板從37℃水浴箱取出時，底部留有水汽，應將板底擦干后進行比色，水汽或孔內氣泡也會使OD值升高;
5、抗原與抗體反應達到完全平衡，依賴于溫度與時間。溫度45℃易引起失活及標記物脫落，溫度低于4℃，影響反應速度。

區(qū)分ELISA試劑盒的方法：
一：選定一個檢測范圍內的濃度做多孔重復，可看出平行性好不好。即板內CV值的大小，此操作時需求當心加樣的性。對一些制造較粗糙的試劑盒來說，板間CV值是較大的。
二：可選用已知濃度的重組細胞因子，稀釋到檢測范圍內作為樣本參加，看檢測的性。
三：對用待測目標的重組細胞因子做試劑盒說明書上標定的小濃度稀釋，可測出靈敏度，主張5個復孔以上才有含義。一般廠家以20個復孔做出的成果作為檢測限。用此實驗可驗證出所購試劑盒的靈敏度是否如說明書所述，也可判別出所購試劑盒是否有夸張之說。
四：如果有相同目標的試劑盒，可用對方的標準品作為樣本，分別參加各自的試劑盒做檢測，以檢測試劑盒的真實性，性。如其中一種是的，比較牢靠的話，可作為標準來驗證另一試劑盒的程度。

操作步驟

　　1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋。

　　200ng/L

　　5 號標準品

　　150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液

　　100ng/L

　　4 號標準品

　　150μl 的 5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

　　50ng/L

　　3 號標準品

　　150μl 的 4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

　　25ng/L

　　2 號標準品

　　150μl 的 3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

　　12.5ng/L

　　1 號標準品

　　150μl 的 2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液

　　2. 加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、 待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測樣品 10μl(樣品終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

　　3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

　　4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

　　5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復 5 次，拍干。

　　6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。

　　7. 溫育：操作同 3。

　　8. 洗滌：操作同 5。

　　9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

　　10 分鐘.

　　10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(此時藍色立轉黃色)。

　　11. 測定：以空白孔調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內進行。

ELISA【實驗原理】
ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。
試劑盒內含有分析所需的所有必需試劑，操作簡單便捷；試劑盒內組分經實驗優(yōu)化，確保更高的檢測靈敏度

規(guī)格: 96T/48T

酶標儀檢測波長: 450 nm

所需樣本體積: 50-100ul

雙贏供應種屬：大小鼠、豚鼠、兔子、牛、羊、豬、雞、植物ELISA試劑盒等

檢測目的：用于測定血清，血漿及相關液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標本。

適用范圍:僅供科研

貯存方法：試劑盒未拆開，4℃保存。已拆開，標準品-20℃保存，其它4℃保存。

有效期：6個月
ELISA試劑盒產品用途：

【靈敏度高】：由于抗體聯(lián)結上了酶，因此借助于酶與底物的顯色反應，顯示抗原與抗體的結合，大大提高了檢測的靈敏性，從而使檢測水平接近放射測定法。

【專一性強】：抗原和抗體的反應是專一反應，而酶技術以反應為基礎，所檢測的對象是抗原（或抗體），使用的抗體除標記了酶以外，與普通抗體的反應特性并無多大差別。

保質期： 2-8℃保存，切勿冷凍，有效期為六個月