供應(yīng)商 | 湖北貓爾沃生物醫(yī)藥有限公司 店鋪 |
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認(rèn)證 | |
報(bào)價(jià) | 人民幣 600.00元 |
重金屬 | 0.0002 |
砷含量 | 0.0002% |
酶活力 | 10萬 |
關(guān)鍵詞 | 湖北高純度腸激酶,腸激酶廠家價(jià)格,湖北腸激酶,生物酶制劑腸激酶 |
所在地 | 湖北武漢 |
1年
腸激酶酶活測定是評估腸激酶催化活性的實(shí)驗(yàn)方法,常見的測定思路包括以下幾種:
1. 發(fā)色底物法
- 原理:利用腸激酶能夠特異性切割含有特定氨基酸序列的合成發(fā)色底物,切割后釋放出發(fā)色基團(tuán),通過檢測發(fā)色基團(tuán)吸光度的變化來計(jì)算酶活。
- 步驟:
- 準(zhǔn)備含有特定序列的發(fā)色底物溶液。
- 加入適量的腸激酶溶液,在適宜的溫度和 pH 條件下反應(yīng)一段時(shí)間。
- 終止反應(yīng),并測定反應(yīng)液在特定波長下的吸光度。
- 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出酶活性。
2. 熒光底物法
- 原理:與發(fā)色底物法類似,只是使用的是能產(chǎn)生熒光的底物,酶切后釋放出熒光基團(tuán),通過檢測熒光強(qiáng)度來測定酶活。
- 步驟:
- 配制熒光底物溶液。
- 加入腸激酶啟動(dòng)反應(yīng)。
- 反應(yīng)結(jié)束后,用熒光分光光度計(jì)檢測熒光強(qiáng)度,計(jì)算酶活。
3. 蛋白底物法
- 原理:使用含有腸激酶識別序列的蛋白質(zhì)作為底物,腸激酶切割后通過 SDS-PAGE 等方法檢測產(chǎn)物的生成量來計(jì)算酶活。
- 步驟:
- 準(zhǔn)備含有特定序列的蛋白底物。
- 與腸激酶反應(yīng)。
- 反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行 SDS-PAGE 電泳分析。
- 根據(jù)蛋白條帶的灰度或強(qiáng)度計(jì)算酶活。
在進(jìn)行腸激酶酶活測定時(shí),需要注意控制反應(yīng)條件(溫度、pH、反應(yīng)時(shí)間等)的一致性,以確保測定結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。
腸激酶是一種特異性的蛋白酶,其工作原理主要在于對蛋白質(zhì)或多肽前體的特定切割。
腸激酶識別并作用于一段特定的氨基酸序列(通常是在目標(biāo)蛋白的氨基端),將其切斷,從而使無活性的蛋白前體轉(zhuǎn)變?yōu)橛谢钚缘某墒斓鞍踪|(zhì)。
例如,在生物技術(shù)中常用于激活融合蛋白,如將融合蛋白中的目標(biāo)蛋白從融合伙伴中切割釋放出來。這種特異性的切割作用使得腸激酶在蛋白質(zhì)的加工和成熟過程中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。
在基因工程中,常用的切割酶包括限制性內(nèi)切酶。 限制性內(nèi)切酶能夠識別特定的核苷酸序列,并在特定的位點(diǎn)切割 DNA 分子。它們的作用就像一把“分子剪刀”,能夠把 DNA 剪成具有特定末端的片段,以便于后續(xù)的基因操作,如連接、重組等。 不同的限制性內(nèi)切酶識別的核苷酸序列不同,產(chǎn)生的 DNA 片段末端也有所不同,有的產(chǎn)生平末端,有的產(chǎn)生粘性末端。 常見的限制性內(nèi)切酶如 EcoRⅠ、BamHⅠ 等。
所屬分類:非營養(yǎng)性添加劑/酶制劑
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