硫黃素T?(Thioflavin T)外觀為黃色至赭色粉末,熔點約?212℃?,可溶于水,需避光密封儲存于室溫環(huán)境。
當(dāng)與淀粉樣蛋白結(jié)合后,硫黃素T熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng),大激發(fā)波長從385 nm紅移至450 nm,大發(fā)射波長從445 nm紅移至482 nm,因此廣泛應(yīng)用于組織學(xué)和蛋白質(zhì)表征中,用于識別樣本中是否存在淀粉樣纖維。
硫黃素T可在單分子水平以寡聚態(tài)(如二聚體、四聚體、六聚體)選擇性結(jié)合胰淀素蛋白,其中“2×2”四聚體能量優(yōu)、結(jié)合穩(wěn)定,揭示了其分子識別的微觀機(jī)制。
操作硫黃素T時應(yīng)佩戴護(hù)目鏡、手套及N95口罩,避免皮膚接觸,若接觸后需立即用大量清水沖洗。該物質(zhì)對水體具有輕度毒性,禁止隨意排放。
?硫黃素T?(Thioflavin T)主要應(yīng)用于?生命科學(xué)與醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域?,尤其在神經(jīng)退行性疾病的病理機(jī)制研究中發(fā)揮關(guān)鍵作用。
硫黃素T適用于動態(tài)監(jiān)測α-突觸核蛋白、Aβ等纖維化過程:
?儲備液配制?:用蒸餾水新鮮配制1 mM硫黃素T儲備液,并經(jīng)0.2 μm濾器過濾。
?工作液稀釋?:用PBS(pH 7.4)稀釋至終濃度?25 μM?(每孔100 μL)。
?加樣?:向96孔板中加入10 nM前體纖維或100 μM單體蛋白樣品。
?混合與密封?:輕柔混勻后密封板子。
?孵育與檢測?:置于37℃震蕩孵育器(600 rpm)中,使用熒光酶標(biāo)儀定時讀數(shù)(激發(fā)450 nm,發(fā)射485 nm),持續(xù)監(jiān)測1–72小時。
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